光度计的光学系统基本上由三部分组成：光源（氘灯、钨灯）、单色仪（光栅、狭缝）和检测器（光电二极管、光电倍增管）。在我们使用的波长范围内（通常紫外-可见光仪器在190nm～1100nm的范围内），在不同波长（光源的发射强度、单色仪的色散强度和检测器的放大率），上述组件的响应值是不同的；一般来说，即使没有样品，如果仪器不进行基线校准，吸光度或透射率在190nm至1100nm范围内也不会是一条直线，这是一种客观的物理现象。分光光度计的基线校准分为系统基线校准和用户基线校准，下面我们就一起来看看具体的校准方法。

系统基线校准

系统基线的校准相对简单。通常，样品不在样品室中放样，仅校准光学系统；如果有必要使用全波段测量，那是另一回事。同时，应注意，系统基线不需要频繁校准。通常，它可以半个月或一个月校准一次。对于某些仪器，系统基线校准过于频繁，这将导致严重的基线漂移。

用户基线校准

正确的校准方法是将两个装有空白溶液的反应杯分别放置在样品和参考光路中，校准波长范围大于分析波长范围；例如，如果分析设置范围为220nm～500nm，则校准波长应设置为210nm～510nm；等待校准完成，然后将波长设置回220nm～500nm的原始范围。这种校准方法的优点是：如果校准波长与分析波长一致，则在校准基线的两端可能存在较大的噪声；如果校准范围大于实际分析范围并且消除末端，则可以提高分析精度。

值得注意的是，一些仪器操作员在执行基线校准时，没有将参考溶液放在参考侧，即他们使用空气进行参考控制。这种方法可能对可见光区域的一些样品影响很小，但在紫外区域效果会很明显。严格来说，以空气为参考测量的结果不是真实的校准光谱。

基线校准注意事项

（1）在基线校准期间，确保仪器有一定的预热时间。

（2）每次更换参考溶液后，应再次进行基线校准。

（3）如果参考溶液的吸光度大于样品的吸光度值，则测试结果为阴性。此时，有必要考虑使用哪种解决方案进行基线校准。

（4）在进行基线校准时，应考虑试剂的波长范围，因为某些试剂在特定波长下的吸光度值将是无限的。此时，校准将超出仪器的有效范围，无法获得真实结果。目前，试剂的波长范围一般标注在试剂瓶的标签上。